利用可见光等测定物质的吸收光谱,利用此光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法,称为分光光度法,使用的仪器是分光光度计。
可见分光光度计是一种结构简洁、使用方便的单光束分光光度计,是生物化学研究中*的基本手段之一。
可见分光光度计的工作原理是:
当一束单色光照射待测物质的溶液时,当某一定频率(或波长)的可见光所具有的能量(hf)恰好与待测物质分子中的价电子的能级差相适应(即δe=e2-e1=hf)时,待测物将对该频率(波长)的可见光产生选择性的吸收。
用可见分光光度计可以测量和记录其吸收程度(吸光度)。
由于在一定条件下,吸光度a与待测物质的浓度c及吸收地长度l的乘积成正比,即a= kcl,所以,在测得吸光度 a后,可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。